MSP 高通量筛选系统基于荧光标记及介电泳推动的油包水液滴分选原理,只需单的液滴制备液滴育,液滴分选步骤,即可单次实现 10^7 突变库或基因工程库微生物的分离及功能筛选。独特的关联表型与基因型筛选,可同时兼顾胞外分泌蛋白、胞膜或胞内标志物的检测。
工作流程:
基因突变库或宏基因组库构建:通过随机突变、饱和突变等方法构建突变库,酶切或机械剪切加载体连接构建宏基因组文库,并转染至大肠杆菌、酵母等微生物中。
微液滴制备:使用液滴生成仪和配套芯片,将单个微生物与检测试剂包裹在 pL 级的微液滴反应单元中。可在 10 min 内完成分离和包裹。
细胞孵育:在微液滴内,微生物分泌酶与底物反应,或裂解后释放酶与探针反应,产生能被 MSP 液滴分选仪识别的荧光信号。
液滴分选:利用介电泳等技术,MSP 液滴分选仪能够对含目标菌株 / 细胞的阳性液滴进行高通量检测及分选、富集,分选速度可达 200~1000 液滴 / 秒,富集效率超过 95 %,细胞得率 ≥80 %。(1 h 可分选近百万单克隆细胞,单次可分选百万至千万克隆)。
液滴分配:可实现将单个目标微液滴收集至对应的孔板中,灵活适配 96/384 孔板。
平台优势:
独特性:整合流式分选与孔板检测为一体,直接关联表型与基因型的功能性微生物筛选,涵盖微生物胞外分泌产物(蛋白)、细胞表面及胞内标志物的单参数或多参数分选。
高通量:单次实现千万级液滴即百万克隆分选。
高效率:筛选速度相对传统 96 孔板法,提高 3-4 个数量级。
省时间:传统数周的筛选工作缩减至 1-2 天。
高灵敏:常规微孔板单个微生物需数周才能检测分泌蛋白,MSP 系统的 nl 级油包水体系包裹的单细胞,几个小时即可检测到分泌蛋白。
低成本:减少试剂用量,试剂消耗降至传统方法的百万分之一。